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August 31st 　All samples　 　DNA template　 　0.5uL　 　10× KOD plus buffer　 　10uL　 　2mM dNTPs　 　10uL　 　25mM MgSO4　 　3.2uL　 　10P 5’ primer　 　3uL　 　10P 3’ primer　 　3uL　 　KOD plus　 　2uL　 　dH2O　 　68.3uL　 　Total　 　100uL　 　Temperature 　Time　 Cycle 　　95℃　 　2min　 　　95℃　 　15sec　 　25 cycle　 　　58℃　 　30sec　 　25 cycle　 　　68℃　 　30sec　 　25 cycle　 　　68℃　 　30sec　 　　14℃　 　∞　 September 1st 　All samples　 　DNA template　 　0.3uL　 　10× KOD plus buffer　 　10uL　 　2mM dNTPs　 　10uL　 　25mM MgSO4　 　3.2uL　 　10P 5’ primer　 　3uL　 　10P 3’ primer　 　3uL　 　KOD plus　 　2uL　 　dH2O　 　68.5uL　 　Total　 　100uL　 　Temperature　 　Time　 　Circle　 　　95℃　 　2min　 　　95℃　 　15sec　 　25 cycle　 　　59℃　 　30sec　 　25 cycle　 　　68℃　 　1min30sec(Act5c and LacZ) or 2min(GAL4 and U-T)　 　25 cycle　 　　68℃　 　1min30sec(Act5c and LacZ) or 2min(GAL4 and U-T)　 　　14℃　 　∞　 September 3rd 　All samples　 　DNA template　 　0.2uL　 　10× KOD plus buffer　 　5uL　 　2mM dNTPs　 　5uL　 　25mM MgSO4　 　1.6uL　 　10P 5’ primer　 　1.5uL　 　10P 3’ primer　 　1.5uL　 　KOD plus　 　1u　L 　dH2O　 　34.2uL　 　Total　 　50uL　 　Temperature　 　Time　 　Circle　 　95℃　 　2min　 　95℃　 　15sec　 　25 cycle　 　55℃(GAL4) and 58℃(Except for GAL4)　 　30sec　 　25 cycle　 　68℃　 　2min30sec　 　25 cycle　 　68℃　 　2min30sec　 　14℃　 　∞　 September 4th 　9/3 GAL4　 　40uL　 　M buffer(TOYOBO)　 　5uL　 　XbaⅠ(TOYOBO)　 　0.5uL　 　SpeⅠ(TOYOBO)　 　0.5uL　 　dH2O　 　4uL　 　Total　 　50uL　 　each DNA　 　40uL　 　3 buffer(NEB)　 　5uL　 　BglⅡ(NEB)　 　0.5uL　 　dH2O　 　4.5uL　 　Total　 　50uL　 　9/3 GAL4　 　23uL　 　M buffer(TOYOBO)　 　10uL　 　XbaⅠ(TOYOBO)　 　1uL　 　SpeⅠ(TOYOBO)　 　1uL　 　CIP　 　0.5uL　 　dH2O　 　64.5uL　 　Total　 　100uL　 September 5th 　EGFP　 　pSB1C3　 　DNA template　 　40uL　 　23uL　 　3 buffer　 　5uL　 　5uL　 　BglⅡ　 　0.5uL　 　0.5uL　 　dH2O　 　4.5uL　 　21.5uL　 　Total　 　50uL　 　50uL　 　DNA template　 　40uL　 　4 buffer(NEB)　 　5uL　 　SpeⅠ　 　0.5uL　 　100×BSA 　0.5uL　 　CIP　 　0.5uL　 　dH2O　 　4uL　 　Total　 　50uL　 　1uL　 　1uL　 　dH2O　 　3uL　 　Ligation high　 　2.5uL　 　Total　 　7.5uL