Team:KIT-Kyoto/Notebook-week1p

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August 23rd




August 24th




August 25th


　All DNA　　500ng　　1ug　
　pEGFP-C　　3uL　　6uL　
　H buffer(TOYOBO)　　5uL　　5uL　
　BamHⅠ(TOYOBO)　　1uL　　1uL　
　BglⅡ(TOYOBO)　　1uL　　1uL　
　100×BSA　　0.5uL　　0.5uL　
　dH2O　　39.5uL　　36.5uL　
　Total　　50uL　　50uL　




　DNA sample　　23uL　
　4 buffer(NEB)　　5uL　
　EcoRⅠ-HF(NEB)　　1uL　
　SpeⅠ(NEB)　　1.5uL　
　100×BSA　　0.5uL　
　dH2O　　19uL　
　Total　　50uL　


　All samples　
　DNA template　　0.5uL　
　10× KOD plus buffer　　10uL　
　2mM dNTPs　　10uL　
　25mM MgSO4　　3.2uL　
　10P 5’ primer　　3uL　
　10P 3’ primer　　3uL　
　KOD plus　　2uL　
　dH2O　　68.3uL　
　Total　　100uL　


　Temperature　　Time　　Circle　
　　95℃　2min
　　95℃　15sec　25 cycle　
　　58℃　30min(UAS) or 2min10sec(pSB1C3)　25 cycle　
　　68℃　2min30sec　25 cycle　
　　68℃　2min30sec
　　14℃　∞


August 26th




August 27th


　pEGFP-C2(cut)　　1uL　
　Ligation high　　2.5uL　
　dH2O　　5uL　
　Total　　7.5uL　






August 28th


August 29th


　pEGFP-C2-1, -2, -3, -4　　1uL　
　10×H buffer(TOYOBO)　　0.5uL　
　XhoⅠ　　0.1uL　
　PstⅠ　　0.1uL　
　dH2O　　3.3uL　
　Total　　5uL　




　All samples　
　DNA template　　0.5uL　
　10× KOD plus buffer　　10uL　
　2mM dNTPs　　10uL　
　25mM MgSO4　　3.2uL　
　10P 5’ primer　　3uL　
　10P 3’ primer　　3uL　
　KOD plus　　2uL　
　dH2O　　68.3uL　
　Total　　100uL　


　Temperature　　Time　　Cycle　
　95℃　　2min　
　95℃　　15sec　　25 cycle　
　58℃　　30sec　　25 cycle　
　68℃　　30sec(UAS) or 1min(EGFP)　　25 cycle　
　68℃　　30sec(UAS) or 1min(EGFP)　
　14℃　　∞　




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